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sirna转染实验步骤与转染试剂推荐
2024-09-06 sirna转染实验步骤（以24孔板为例）1．接种细胞对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为60%-80%为佳。对于悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，用PBS清洗细胞1-2次，用250μLOpti-MEMI减血清培养基(无血清)重悬细胞，在24孔板中进行细胞铺板，细胞密度为60-80%。2．准备转染试剂-siRNA复合物（或转染试剂-miRNA复合物）(1)对于每孔细胞，取2μLsiRNA(20μM，DEP...
从实验室到临床：无血清细胞存冻液的转化应用之路
2024-08-26 在生物医学研究和细胞治疗领域，细胞的长期保存与复苏是至关重要的环节。传统的细胞冷冻保存技术多依赖于含血清的培养基，但血清来源的不确定性及可能引入的污染，限制了其在某些领域的应用。无血清细胞存冻液作为一种新兴的细胞保存解决方案，为细胞冷冻保存技术开辟了新的篇章。本文将深入探讨无血清细胞存冻液的原理、优势及其在细胞保存领域的重要性。无血清细胞存冻液是一种专为细胞冷冻保存设计的无血清、无蛋白的保存液。它通常含有细胞保护剂，如二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇等，这些成分能够减少细胞在冷...
李记生物预染蛋白分子量标准（蛋白Marker的分类与选择）
2024-08-23 蛋白Marker即蛋白分子量标准，是几种已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。在WesternBlot实验中，蛋白Marker主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，此外，蛋白Marker还可以用来辅助判断蛋白转膜是否成功或蛋白在凝胶上的电泳进度等作用，所以选择合适的蛋白Marker也是实验成功的重要条件之一。李记生物预染蛋白分子量标准预染蛋白在不同的缓冲体系下有不同的表观分子量，以上2个图片为两种缓冲体系下的电泳示意图。适合作为SDS-PAG...
无血清细胞冻存液的操作方法
2024-08-21 无血清细胞冻存液的操作方法主要包括细胞的收集、离心、冻存液的加入、分装、冻存以及后续的解冻与复苏等步骤。以下是详细的操作方法：一、细胞的收集与离心细胞收集：使用常规方法收集处于对数生长期的悬浮细胞或贴壁细胞。对于贴壁细胞，可以使用胰酶或EDTA等试剂进行消化，使其从培养瓶或培养板表面脱落，然后收集到试管或离心管中。细胞离心：将收集到的细胞悬浮液置于离心管中，进行离心处理以收集细胞沉淀。离心条件通常为1,0002,000rpm，4℃，持续35分钟。注意，离心时应确保温度适宜，以...
蛋白酶K的酶学特性及其在生物医学研究中的重要性
2024-08-17 蛋白酶K，属于一种广谱蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）发酵产生。它能够在较宽的pH值范围内（pH4-12）保持活性，且在高温条件下（65℃）仍能稳定工作，这种稳定性使蛋白酶K能够在多种实验条件下发挥其作用，成为科研人员手中的得力助手。在分子生物学领域，蛋白酶K的应用尤为广泛。在DNA提取过程中，蛋白酶K能够高效地降解细胞和组织中的蛋白质，包括那些与DNA紧密结合的组蛋白，从而释放出纯净的DNA，为后续的PCR扩增、测序等实验提供高质量的DNA模板。此...
RIPA裂解液介绍与如何选择
2024-08-15 提到蛋白提取，大家不约而同会想到RIPA裂解液，裂解液加入样品中，离心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我们真的用对了吗？RIPA裂解液是从动物细胞或组织中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污剂（表面活性剂）裂解细胞膜和核膜，从而获取细胞和组织中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的选择RIPA裂解液中主要包含去污剂，缓冲体系，等渗体系，变性剂、稳定剂等。其中去污剂是细胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基团和极性亲水头端基团组成的两性分子，它们能够降低水的表面张力，所...
bca法测蛋白浓度原理、实验步骤及注意事项
2024-08-15 蛋白质浓度测定是用于计算纯化方法的回收率的重要方法。常用的测定方法包括双缩脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白浓度检测法等。其中常用的方法就是BCA法。BCA全称是BicinchoninicAcidAssay，也叫SmithAssay，这个方法是由PaulK.Smith发明的。这个方法通过展示不同浓度样品的颜色变化来判断蛋白的浓度。检测原理BCA是一种碱性的水溶性复合物，性质稳定。在其提供的碱性环境下，蛋白质可以将BCA试剂中的Cu2+还原为Cu+，Cu+继而与BCA试...
DNA电泳套装：揭开基因的奥秘
2024-08-15 在现代生物技术领域，DNA电泳技术已成为一种实验手段。它广泛应用于基因克隆、基因突变检测、DNA序列分析等领域。而DNA电泳套装则是进行这项实验的工具。本文将为您详细介绍DNA电泳套装的组成、原理及其在生物科研中的应用。一、DNA电泳套装的组成DNA电泳套装主要包括以下几部分：电泳仪：用于提供稳定的直流电源，使DNA分子在电场作用下发生迁移。电泳槽：一般为矩形或梳子形状，用于装载电泳凝胶。电泳凝胶：由聚丙烯酰胺或琼脂糖等物质制成，是DNA分子迁移的载体。凝胶制备试剂：包括凝胶...

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